测序原理
I、Edman降解测序法
Edman测序循环包括3步：
1. 在碱性条件下，PITC与蛋白N端的游离氨基结合
2. 在酸性溶液中，N端残基被切除
3. PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基，经过在线的HPLC分析，根据洗脱时间不同，从而确定氨基酸种类。
II、质谱测序法
质谱测序原理是将蛋白质经胰蛋白酶酶切后，直接用串联质谱测定酶切肽段混合物，然后通过一级质谱选择N端肽段离子进行串联质谱分析而得到N端序列。能够对混合蛋白、末端封闭或糖基化的蛋白质进行测序。
测序平台
SHIMADZU PPSQ-33A测序仪
平台优势
• 高灵敏度检测PTH-氨基酸
• UV-VIS探测器SPD-20A
• 稳定分析微量样品
• 准确区分分子量相近的氨基酸（I/L、Q/K）
Obitrap Fusion Lumos质谱仪
平台优势
• 分辨率高达 500,000 FWHM
• 高容量离子传输管
• 超低检测限的电动离子漏斗
• 高清ETD，显著增加碎片离子覆盖率
测序亮点
• 可测定多种形式的样品：蛋白溶液、PVDF蛋白条带
• 仅需1-10 ug蛋白样品即可完成检测
• 可测定蛋白N端多达70个氨基酸序列
• 全自动序列分析，序列分析更准确
• 测序不受N端封闭，PEG和糖基化等N端修饰的影响