对于可以传代的细胞样品来说,我们可以采取SILAC的方法完成对于细胞蛋白质组的标记过程,但是许多其他研究体系,比如组织样品以及不能进行传代培养的细胞来说,需要其他的标记方法来完成定量蛋白组学分析。TMT, iTRAQ等基于体外(in vitro)标记的定量方法应运而生。
iTRAQ标签包括三部分,如下图:
1. 报告基团(reporter group):指示蛋白样品丰度水平。
2. 平衡基团(balance group):平衡报告基团的质量差,使等重标签重量一致,保证标记的同一肽段m/z相同。
3. 肽反应基团(amine-specific reactive group):能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接,从而标记上肽段。
来自不同样品的同一肽段经TMT/iTRAQ试剂标记后具有相同的质量数,并在一级质谱检测(MS1)中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后,在二级质谱检测(MS2)中,不同的报告基团被释放,它们各自的质谱峰的信号强弱,代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。TMT/iTRAQ定量蛋白组学研究因其测定精准度高适应样品种类多,目前已有很广泛的应用。百泰派克在传统的TMT/iTRAQ分析技术的基础上,提供TMT/iTRAQ/MultiNotch MS分析技术,使用三级碎片报告离子进行定量,可进一步提高TMT/iTRAQ定量蛋白组学分析的精度,进一步提高定量准确性。
百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,Orbitrap Fusio Lumos质谱平台结合Nano-LC,推出基于TMT/iTRAQ/MultiNotch MS的定量蛋白组分析服务技术包裹,您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的蛋白寄给我们,我们会负责项目后续所有事宜,包括蛋白酶切、肽段标价、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。
iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析实验流程
iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析技术特点
• 高通量定量蛋白分析:可以同时分析10个样品;适合大量临床样本,多对照组大规模实验分析,发现新的生物标记物
• 体外标记,适用于分析组织,细胞,血液等多种样品
• 质谱分析灵敏度高,可检测较低丰度蛋白,大范围比较蛋白相对丰度
• 可与富集磷酸化等修饰肽段的方法联用,更准确研究翻译后修饰变化
iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析样品要求
注意:样品运输请使用足量的干冰运输,并且尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
中/英文项目报告
在技术报告中,百泰会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:
1, 实验步骤(中英文); 2, 相关的质谱参数(中英文); 3, 鉴定的氨基酸的详细信息; 4, 质谱图片; 5, 原始数据